PCR實驗室設計标準和施工(gōng)方案業好

發布時間：2020-06-01浏覽： 次

　　PCR實驗室又(yòu)叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶鍊式坐還反應(PolymeraseChainReaction)的簡稱。是一(資區yī)種分(fēn)子生(shēng)物(wù)學技術，用來放(fàng)大做學(dà)指定的DNA片段，可看作生(shēng謝南)物(wù)體(tǐ)外(wài)的特殊DNA複制。按照DNA基因追蹤系子樹統，能快速了解病人身體(tǐ)内的病毒含量，從話其精确度更是高達納米級别，精準檢測乙肝病毒在病人身體(tǐ)内存秒東在的數量、是否複制、是否傳染、傳染性有多強、是否必要服藥、肝嗎新功能有否異常改變能及時判定病人最合适使用遠土哪類抗病毒藥物(wù)、判定藥物(wù)療效怎麼樣、給臨床治療提供了安全可靠的快民檢驗依據。
　　
　　PCR實驗室主要實驗項目：病毒檢測，乙型肝炎，禽相民疫病，癌基因的檢測和診斷，DNA指紋，個體(tǐ)識别，親子鑒定及法醫物(wù司吃)證等。

PCR實驗室設計
　　
　　現階段PCR運用已取得長久的發展壯大(d微愛à)，已變成疫病診斷，疫情控制等層面的有力工(gōng)具，為了能規避在P那去CR方法中(zhōng)發生(shēng)污染得煙及發生(shēng)假陽性和假陰性結果等狀況，确保結果的紅愛精确性，在實驗室環境安全控制上嚴苛保證實驗室獨立區域設計，功能分(fēn議資)區明确，确保實驗室潔淨環境，人流物(wù)流嚴苛分(fēn)流，設林計計合理的壓力梯度，建立有序的氣流組織方向，切實保證規避交叉裡湖污染。
　　
　　規避污染是PCR實驗室設計建設首先考慮吃山關鍵
　　
　　因為PCR技術的高度敏感性，PCR技術要求高歌通、影響因素多，從樣品制備到結果的形成，任何一(yī)中子處細微的差錯均會造成結果的偏差，造成樣品的假陽性上路和假陰性結果。
　　
　　PCR實驗室研究過程中(zhōng)，許多 操作都會形做鐘成氣溶膠，例如離(lí)心、混勻等操作闵。為爸醫确保環境安全，PCR實驗室設計建設需獨立區域設計，規避與其餘環境的交叉混雜(都文zá)，以下(xià)黛仁淨化按照我(wǒ)(wǒ)們做過的工(計好gōng)程案例從平面布局、淨化區域劃分(fēn)，人農草物(wù)流設計和壓差控制等層面具體(tǐ)化講解。都時
　　

　　一(yī)、PCR實驗室标準規範

　　
　　《實驗室生(shēng)物(wù)安全通用影照要求》國家标準GB19489-2008
　　
　　《臨床基因擴增檢驗實驗室工(gōng)作規範》衛醫發[2002]8議如号文
　　
　　《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》衛醫發[2002]10号文
　　
　　《臨床基因擴增檢驗實驗室設計标準》衛醫發[200話哥2]10号文附件
　　
　　《基因檢驗實驗室技術要求》國家質監檢驗總局SN/T119姐務3-2003
　　
　　《潔淨室及相關受控環境-生(shēng)物(wù)污染控制》是冷國際标準ISO14698
　　
　　《潔淨廠房設計規範》國家标準GB500732013
　　
　　《潔淨室施工(gōng)及驗收規範》GB50技歌591-2010
　　
　　《室内空氣質量标準》國家标準GB/T18832002
　　
　　《生(shēng)物(wù)安全實驗室建築技術規範房師》國家标準GB50346-2011《病原微生(shēng)物(wù)學讀實驗室生(shēng)物(wù)安全管理條例》衛生(shēng水文)部(2004-11-12)
　　

　　二、PCR實驗室區域劃分(fēn)

　　
　　PCR實驗室建設按照規定分(fēn)成四爸樂個獨立的工(gōng)作區域：試劑貯存和準備區、标本制備區、有拍擴增反應混合物(wù)配制和擴增區、擴增産物(wù)分(fēn飛我)析區。

PCR實驗室區域劃分(fēn)
　　
　　1、試劑準備區：用以試驗試劑的準備。
　　
　　該區域為正壓，作用是避免污染物(wù)質溢日金入。該區域裡面又(yòu)可分(fēn)成3個區域：普通提取工習試劑的準備區、PCR試劑準備區和PCR主反應液準放少備區。在普通提取試劑的準備區内準備一(yī)些樣品核酸提取時所需的店樂裂解液、提取液等；PCR試劑準備區用以PCR試劑的制備和保存。例如準備引物(w工年ù)、探針等PCR試劑。為了能避免交叉污染，避免反複冷凍和解凍，試慢場劑存貯溶液應當被平均為小(xiǎo)的工(gōng)作體(tǐ)積，存儲在問山這個房間内以便後用：PCR主反應液準備區将實行主反應混合液(除了樣品。作農所有的PCR所需試劑的混合)添加到PCR管的操作。重要暗照提示：不可以将其他房間内的材料(包含擴增、模闆和目标核酸或陽性對照、供應品動議、或設備)帶進試劑準備區。
　　
　　2、樣品準備區：該區域無壓力設定要求。
　　
　　該區域是用以對樣品實行分(fēn)樣，将樣品實行會來研磨、粉碎、勻漿的區域。考慮到在這些粉碎、研磨和勻漿處理過程中(zhōng)會雜見産生(shēng)氣溶膠，因而，存在陽性樣視又品污染後續操作的可能性。該區域與後邊的區域應嚴苛隔離(l章店í)，應放(fàng)到與後邊的3個區域隔開(kāi森來)的獨立的房間内中(zhōng)。在樣品準備區内還可開(kāi)設1近個個專門的封閉區或房間内用以樣品的接收和存電上儲。這一(yī)房間内能夠擺放(fàng)冰箱用以樣品存儲，應當和樣品準備區水器其他區域隔離(lí)開(kāi)。樣品準備區域的工(g些業ōng)作人員(yuán)不能進到試劑準備區。
　　
　　3、核酸提取區：核酸提取區是實行樣品核酸數兵提取的區域。
　　
　　該區域為負壓，作用是避免核酸外(wài)溢導緻污染。樣品準備區一下又(yòu)包含從樣品中(zhōng)實行核酸提取新拿和純化的區域及其将核酸加到包含PCR主反應混合液管中(zhōn電得g)的操作區域。添加完樣品後，PCR管的蓋子要盡量快地蓋好。厭草使用PCR闆和膠蓋時，陽性對照和含目标序列的樣品要與待測樣本分(fē要音n)開(kāi)操作，以避免模闆添加時導緻交叉污染
　　
　　重要提示：這一(yī)房間内裡的一(yī)切物(司我wù)品不能帶人試劑準備區。
　　
　　4、擴增和産品檢測區：該區域是用來實行又術PCR擴增和PCR分(fēn)析。
　　
　　PER儀擺放(fàng)在這個區域。房間内保持負學理壓，作用是避免核酸外(wài)溢。在該區域工(gōng)作人員(yuán)妹土一(yī)定要始終穿戴工(gōng)作服和手套關能，在離(lí)開(kāi)房間内前脫掉，避免擴增子污染其他地點。所有的用厭校以擴增和産品檢測的設備要特定用以這一(yī)房算麗間内。PCR分(fēn)析]二作也設定在該區小要域，例如：酶切、測序、克隆等，但實驗室應盡量把這些活動分(fēn)隔在不同區域低光或不同房間内。以降低擴增産物(wù)的污染風險。要是沒湖我有條件在該區域開(kāi)設負壓，此區域必新山須建立排風裝置。
　　

　　三、PCR實驗室設計要點

　　
　　PCR實驗室能夠是分(fēn)散方式，還可以是組合方式。完成1組PCR一空實驗，通常情況下(xià)應經過試劑配制、樣品處理、核酸擴增及産物(w光村ù)分(fēn)析四個實驗過程，若實驗工船機(gōng)藝需要，還應添加樣品粉碎過程。
　　
　　1、分(fēn)散方式PCR實驗室
　　
　　所謂的分(fēn)散方式PCR實驗室，就是指完少南成以上所述實驗過程的實驗用房彼此之間距離(lí)較遠，呈分(fēn)散布置方暗船式。針對這種布置方式的PCR實驗室，考慮到每個實驗相互間不容易相互幹擾雜好，因而無須特殊條件要求。
　　
　　2、組合方式PCR實驗室
　　
　　所謂的組合方式PCR實驗室,就是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布銀你置，組成獨立實驗區域的方式。針對組合方式PCR實驗室，考慮到每個實做朋驗間集中(zhōng)布置，很容易導緻相互幹擾，因而多是，對總體(tǐ)布局及其屏障系統具有相應的要求。各室在入口處設緩沖間，以降書計低室内外(wài)空氣交換。

PCR實驗室氣流設計方案
　　

　　四、PCR實驗室氣流設計方案

　　
　　人流物(wù)流設計方案各行其道，避免交叉混雜(zá)森去，整體(tǐ)區域設計方案1個公用走廊，工(gōng)林現作區域相互間設計方案試劑物(wù)品傳輸專門窗，保證人物(w費師ù)分(fēn)流。
　　
　　1、物(wù)流：在試劑準備區與标本制備區、标本地放制備區與PCR擴增區相互間，及其擴增區域和純化區相醫森互間設計方案有電(diàn)子連鎖不鏽鋼傳遞窗，以單雨吧向實行試劑、标本等物(wù)品傳送，配制信南的試劑通過單向傳遞窗由試劑準備區傳輸到标本制備區，處章村理過的标本通過單向傳遞窗由标本制備區傳輸到PCR擴增區，按照工空懂(gōng)藝流程逐次傳輸，避免返流。單向物(wù)品傳送系統既确保了标本試劑黑報不受污染，又(yòu)确保了标本試劑不污染環境。
　　
　　2、人流：工(gōng)作人員(yuán)通過閘間分(fēn)别進到各習拍自實驗區域，出入各實驗區域需要在閘間區域更換潔淨服，洗手消毒時機等。
　　

　　五、PCR實驗室壓差設計

　　
　　PCR實驗室應設計為負壓潔淨室，通過壓差操控，使厭海整個PCR實驗全過程中(zhōng)試劑和标本免受氣溶膠的污染，并且降低擴增他銀産物(wù)對人員(yuán)和環境的污染。
　　
　　每個實驗室與非潔淨區之間的閘間保持正黃唱壓，＞10Pa，實驗與閘間之間的氣流組織方向為：試劑準備區空氣我會流向閘間，标本制備區流向閘間，而PCR擴增區氣流方向由閘間流木這向PCR擴增區，純化區同理；
　　
　　同時按照試劑單向流方向，每個實驗室之間設計不同內爸壓力梯度來實現單向氣流組織方向，由試劑準備區（+20Pa）、标本街放制備區（+15Pa）、擴增反應一(yī)區（-5Pa）、純化區（裡計-10Pa）、擴增反應二區（-20Pa）、到後純化區（-25Pa）壓力逐漸降低老風，形成單向負壓壓力梯度。
　　

　　六、PCR實驗室污染的預防與操控

　　
　　PCR實驗室設計的關鍵難題是怎樣避免污染。在現實工(gōn但有g)作中(zhōng)，普遍的有以下(xià)幾種污染類型：擴增産子河物(wù)的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及光高标本間的污染。因為一(yī)旦發生(shēng)污染，實驗就必須要停止，直至嗎厭找出污染源才行，并且實驗結果必須要作廢，訊黑需再次采取實驗。因而發生(shēng)污上湖染後再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時并且繁瑣，浪費(f你子èi)人力物(wù)力。因而要避免污染，首要應是相土預防，而不是排除。
　　
　　1、運行區域的嚴格劃分(fēn)
　　
　　（1）每個實驗區域設置合理；
　　
　　（2）每個實驗區域要有顯著的标記（如醒目的門牌開煙或不同的地面顔色等），以避免每個不同實驗玩又區域設備物(wù)品、試劑等發生(shēng)混淆。
　　
　　2、合理的系統設置
　　
　　（1）合理的空調通風系統設置，盡量采用全送全排老動的空調系統；
　　
　　（2）嚴格的氣流壓力操控，确保不同的實驗區内不近冷同的壓力要求。
　　
　　3、規範的實際操作
　　
　　（1）擴增檢驗實驗室的技術人員(yu木購án)必須要采取上崗培訓，經培訓合格後才能從事臨床基因擴增短技檢驗的運行；
　　
　　（2）在實驗操作全過程中(zhōng)，操作者必須要戴手套，并時常更人一換。除此之外(wài)，實際操作中(zh人會ōng)使用一(yī)次性帽子也是一(yī)個有效地防止污染的措施；
　　
　　（3）清潔運行及時、正确。實驗運行結束後，必須要立即對本區采取清潔。除常火科規的消毒液體(tǐ)對表面采取擦拭消毒或紫業靜外(wài)線燈的照射消毒外(wài)，對某些實驗設備還應采取高壓消毒處理外著。
　　
　　4、嚴格的管理
　　
　　（1）嚴格控制出入實驗室的人員(yuán)。與實人慢驗不相關的人員(yuán)不能随意出入實驗室，有章放條件的情形下(xià)要設置獨立的通道和出入整個實驗區的慢要門；
　　
　　（2）盡可能減少在實驗區内不必要的行走以輛靜減少交叉污染的可能性。
　　
　　（3）擴增産物(wù)分(fēn)析區是最主要的擴增産物(wù)污染來離雪源，廢液不可以在實驗室中(zhōng)亂倒，必須要經消毒液浸沒消毒後在遠離不得(lí)實驗室的地方棄掉，使用過的吸頭等一(yī)次性材料也金光應經消毒液浸沒消毒後統一(yī)處理，如焚燒處理等；
　　
　　（4）擴增産物(wù)分(fēn)析區有可能會用到某些可緻基因突話亮變和有毒物(wù)質，應尤其留意實驗人員(yuán)的安制煙全保障。
　　
　　5、完善的實驗室配套設施
　　
　　完善的實驗室配套設施是确保實驗運行的必備條件，應依據每個實為拍驗室實驗内容的不同配置相對的設備和儀器，如超淨工(紙劇gōng)作台、離(lí)心機、加樣器等。

上海黛仁淨化工(gōng)程有限公司

微信
相關文章推薦
實驗室案例推薦
X

截屏，微信識别二維碼

微信号：13816288164

（點擊微信号複制，添加好友）

  打開(kāi)微信

微信号已複制，請打開(kāi)微信添加咨詢詳情！